Texte de l'animation

Nous allons maintenant étudier un modèle simple : nous réalisons des expériences de liaison à l’équilibre dans un milieu biologique ne contenant qu’un seul type de récepteur, R, pour le ligand L, en utilisant les techniques de marquage radioactif. De plus, le récepteur ne possède qu’un seul site de fixation pour L. Le modèle est donc celui-ci. Après avoir déterminé le temps d’équilibre, nous commençons par incuber l’échantillon biologique en présence de concentrations variables en ligand radioactif. Nous traçons alors le graphe concentration en ligand lié en fonction de la concentration en ligand total: le voici. Les résultats montrent nettement l’existence d’une liaison non spécifique. Nous refaisons l’expérience de la même façon, avec les mêmes concentrations en ligand chaud, mais cette fois en présence d’un grand excès de ligand froid, non radioactif. Et voici les résultats. En calculant point par point la différence entre ces deux expériences, nous obtenons cette courbe : nous observons effectivement une saturation de la liaison démontrant l’existence du récepteur. Pour exploiter totalement cette expérience, il faut maintenant reprendre le schéma. Il est intéressant de calculer la constante de dissociation, Kd, qui est caractéristique à la fois du ligand et du récepteur. Ecrivons le Kd en fonction des constantes cinétiques et en fonction des concentrations. N’oublions pas qu’il s’agit là de concentrations à l’équilibre. Puis, les conservations de la matière : celle du récepteur ainsi que celle du ligand. Supposons maintenant que la concentration en récepteur dans le milieu étudié est connue. Dans ce cas, nous pouvons calculer Y, le taux de saturation du récepteur, et tracer directement le graphe de Scatchard à partir des données de la liaison spécifique. Le voici. Nous obtenons une droite : il n’y a donc bien qu’une seule classe de sites équivalents et indépendants : dans le milieu biologique il n’y a qu’un seul type de récepteur capable de lier le ligand L. La pente de la droite nous permet de déterminer Kd. L’abscisse à l’origine est égale à 1, puisque nous avons posé qu’il n’y avait qu’un seul site de fixation par récepteur. Si, maintenant la concentration en récepteur est inconnue, nous ne pouvons calculer Y et donc tracer ce graphe :. Nous traçons alors : ligand fixé sur ligand libre en fonction du ligand fixé. Nous obtenons comme précédemment une droite de pente -1 sur Kd mais ici l’abscisse à l’origine est égale à Rt, c'est-à-dire la concentration en récepteur total