Texte de l'animation

On ne peut étudier une enzyme que si l'on dispose d'une méthode pour mettre en évidence la réaction catalysée, et, si possible, pour mesurer quantitativement l'importance de ses effets. L'activité de l'enzyme se traduit par une quantité de matière transformée par unité de temps. Or l'importance de cette activité dépend de nombreux facteurs. Elle varie avec : la nature du substrat : choix de la méthode de mesure de la cinétique ; la nature du solvant : pH, force ionique, etc ; la température ; la durée de la réaction : le temps. Le choix de la méthode de mesure de la cinétique dépend surtout de la nature du substrat que l'on va utiliser. En effet, dans les laboratoires de biologie, on utilise surtout deux grandes techniques : les mesures spectrales (absorption UV - visible, fluorescence) et les marquages radioactifs. Le choix de l'une ou l'autre de ces techniques fait que l'on va réaliser soit une étude cinétique par point soit une étude cinétique en continue. Supposons que pour étudier les paramètres cinétiques d'une réaction enzymatique, je dispose d'un substrat radiomarqué. Il est bien évident que je dois disposer également d'un protocole me permettant de différencier le substrat du produit de la réaction (par séparation physique, centrifugation, précipitation sélective ou autre). Pour mesurer l'évolution de la réaction, je n'aurais pas d'autre alternative que de préparer un mélange réactionnel contenant l'enzyme et le substrat radiomarqué, de laisser incuber le temps adoc, de prélever un aliquote de ce mélange, séparer le substrat du produit et de quantifier la radioactivité pour ce temps donné, et cette concentration initiale en substrat. Il faudra bien évidemment utiliser le même protocole pour chaque concentration en substrat, pour chaque temps lorsqu'il s'agira de rechercher le temps d'ordre 0 apparent. Cette méthodologie est un peu lourde et, si nous en avons la possibilité, nous préférons utiliser un substrat chromophore. Juste une remarque sur la courbe de progression, présentée ici, vous voyez cette droite que j’ai tracée : il s’agit de la tangente à la courbe. La pente de cette tangente correspond à la vitesse de réaction. Ici, c’est la tangente à l’origine, la pente sera donc la vitesse initiale. Je peux également prendre une vitesse instantanée, c’est à dire, calculer la pente d’une tangente en un point quelconque de la courbe.