Texte de l'animation

Nous avons vu comment déterminer graphiquement VM et KM. Nous allons maintenant voir quelles informations nous pouvons en déduire. Lorsque la concentration en substrat est saturante, vi = VM Mais VM n’est pas une constante parce que (E)T est modifiable. Mesurer le VM est une façon de mesurer la concentration (E)T. : plus le VM est grand et plus (E)T est grande. On utilise souvent une concentration saturante en substrat, donc la VMax, pour suivre la purification d'une enzyme. L'unité enzymatique a été définie pour cela. En général, 1 u.e. est définie comme la quantité d'enzyme qui permet la formation d'une micromole de P en une minute dans les conditions saturantes en substrat. L'activité spécifique d'une enzyme est un paramètre essentiel permettant de suivre la marche d'une purification. L'activité spécifique est le nombre d'u.e. par unité de masse en protéine. VM dépend de E totale mais également de k2, qui est souvent appelée constante catalytique, kcat. Lorsque l'on connaît (E)T, on détermine k2. kcat peut prendre une valeur comprise entre 10-1et 10puissance 6 s-1. La valeur de k2 est caractéristique de la rapidité de l'enzyme. Plus cette valeur est grande et plus il y aura de mole de produit fabriqué par une mole d’enzyme par seconde. C’est une sorte de fréquence avec laquelle l’enzyme saturée par le substrat fabrique le produit. Cette valeur est également appelée "turnover", fréquence de rotation ou fréquence de renouvellement. Elle est égale au nombre de molécules de substrat converties en produit par unité de temps par une seule molécule d'enzyme à saturation. Mais attention, dans le cas d'enzymes polymériques, ayant plusieurs sites catalytiques, le Turn over est exprimé pour un monomère, un site catalytique. Il faut donc traduire, dans ce cas, la concentration totale d'enzyme en concentration totale en sites catalytiques. VM et kcat. mesure donc la rapidité de la catalyse.